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本成果首先參照 GenBank 收錄的 23 株 SAFV P72 蛋白全基因序 列設(shè)計一對特異性引物，根據(jù)設(shè)計的引物探針最佳反應(yīng)體系和反應(yīng)條件，并對 建立的 PCR 反應(yīng)方法進(jìn)行敏感性、特異性、重復(fù)性試驗；其次，參考非洲豬瘟 病毒 Con09/Bzz020 株 p54 基因的核苷酸序列，進(jìn)行 p54 蛋白的體外表達(dá)，并進(jìn) 一步建立一種間接 ELISA 檢測方法，所建立的兩種檢測方法具有很好的應(yīng)用性， 能夠用于非洲豬瘟疫病的檢測。同時建立了非洲豬瘟的風(fēng)險分析和預(yù)警技術(shù)。 該技術(shù)能對非洲豬瘟進(jìn)行臨床鑒別診斷和預(yù)警分析，特異性好，靈敏度高，應(yīng) 用前景廣闊。 

研發(fā)階段/n本成果合成了人工免疫原和包被原，制備出高效價的特異性抗體，建立了肌肉(豬、雞、魚)、肝臟(豬、雞)、腎臟(豬)中AOZ殘留檢測的ELISA方法，并與建立的多殘留檢測HPLC方法進(jìn)行了對比。該方法的檢測限、回收率、變異系數(shù)均達(dá)到我國獸藥殘留快速檢測的要求。以上述方法為基礎(chǔ)，在國內(nèi)首次研制出動物樣品中AOZ殘留檢測ELISA試劑盒。通過與國外同類試劑盒、HPLC法的比對和動物殘留試驗證明，該試劑盒的靈敏度、準(zhǔn)確度和重現(xiàn)性與國外試劑盒水平相當(dāng)。經(jīng)多家檢測機構(gòu)和研究單位的復(fù)核和應(yīng)用表明，該試劑盒

研發(fā)階段/n本成果合成了人工免疫原和包被原，制備出高效價的特異性抗體，建立了肌肉(豬、雞、魚〉、肝臟(豬、雞)、腎臟(豬)、雞蛋和牛奶中金霉素殘留檢測的ELISA方法，并與建立的多殘留檢測HPLC方法進(jìn)行了對比。該方法的檢測限、回收率、變異系數(shù)均達(dá)到我國獸藥殘留快速檢測的要求。以上述方法為基礎(chǔ)，研制出動物樣品中金霉素殘留檢測ELISA試劑盒。該試劑盒的靈敏度、準(zhǔn)確度和重現(xiàn)性與國外試劑盒水平相當(dāng)。經(jīng)多單位應(yīng)用表明，該試劑盒靈敏、準(zhǔn)確、操作簡便，對金霉素特異性強，適用于金霉素殘留的快速篩選檢測。技術(shù)水平

成果先后獲省級科技進(jìn)步一等獎、國家科技進(jìn)步二等獎。試劑盒可用于禽白血病流行病學(xué)調(diào)查和種禽禽白血病的凈化與根除，具有簡便快速，特異性高，費用低，適于大規(guī)模檢測等特點。

1. 痛點問題 水中內(nèi)分泌干擾物、微囊藻毒素等微量有毒污染物對生態(tài)環(huán)境和人體健康帶來潛在不利影響，已經(jīng)演變成為全球性關(guān)注的重大環(huán)境問題。因此，發(fā)展微量有毒污染物的快速監(jiān)測技術(shù)，對于應(yīng)對微量有毒污染物環(huán)境與健康風(fēng)險具有重要的支撐作用和現(xiàn)實意義。 儀器分析技術(shù)是水中微量有毒污染物標(biāo)準(zhǔn)檢測技術(shù)，然而這類技術(shù)需要昂貴的儀器，冗長費力的樣品準(zhǔn)備過程和專業(yè)的操作人員，限制了此類技術(shù)在污染事故應(yīng)急、現(xiàn)場快速監(jiān)測等領(lǐng)域的應(yīng)用。此外，對于總微囊藻毒素這類包含上百種結(jié)構(gòu)變異體的混合物，依賴于化合物結(jié)構(gòu)實現(xiàn)濃度分析的儀器分析技術(shù)無法窮盡，特別是捕捉到尚未鑒定出來的微囊藻毒素變異體。免疫分析技術(shù)利用抗體對抗原的特異性親和作用，可實現(xiàn)對一種或一類微量污染物的快速高靈敏分析。基于免疫分析原理構(gòu)建的酶聯(lián)免疫檢測試劑盒具有快速、高靈敏、操作簡便、易于標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)點，其核心是抗體材料。特別是，為了篩查總微囊藻毒素結(jié)構(gòu)變異體并預(yù)警藍(lán)藻水華，美國環(huán)境保護(hù)署于2016年公布了最新的未管制污染物監(jiān)測規(guī)則，其明確推薦發(fā)展基于酶聯(lián)免疫檢測試劑盒的總微囊藻毒素快速檢測方法，其中，具有微囊藻毒素結(jié)構(gòu)變異體廣譜識別能力的抗體是發(fā)展該技術(shù)的核心材料支撐。 本項目攻克水中微量有毒污染物免疫檢測中的關(guān)鍵瓶頸，有望解決現(xiàn)有技術(shù)痛點，為發(fā)展水中微量有毒污染物快速ELISA檢測技術(shù)提供支撐。 2. 解決方案 針對水中藍(lán)藻毒素，發(fā)明了一種廣譜型微囊藻毒素單克隆抗體及其制備方法。該抗體能夠特異性識別總微囊藻毒素與節(jié)球藻毒素Adda基團(tuán)，檢出限達(dá)到0.1 ng/ml，對12種微囊藻毒素結(jié)構(gòu)變異體交叉反應(yīng)率55~125%，線性范圍跨越一個數(shù)量級，為研發(fā)總微囊藻毒素ELISA試劑盒提供了材料支撐。針對水中痕量內(nèi)分泌干擾物，發(fā)明了固相識別雌激素受體的雌二醇衍生物篩選方法，可以篩選出與雌激素受體具有高特異性高親和力的衍生物，進(jìn)而可以縮短固相雌二醇與雌激素受體結(jié)合的時間，增加體外環(huán)境下的結(jié)合穩(wěn)定性與親和力；建立了一種利用間接競爭ELISA 高通量快速篩查多種內(nèi)分泌干擾物的方法，可以實現(xiàn)水中多種內(nèi)分泌干擾物的同步快速檢測，典型標(biāo)準(zhǔn)曲線測試結(jié)果顯示該方法對雙酚A檢出限為3.6 μg/L，定量檢測區(qū)間為8.2-264.7 μg/L；對雌二醇檢出限為3.2 μg/L，定量檢測區(qū)間為4.2-12.0 μg/L；對壬基酚檢出限為24.8 μg/L，定量檢測區(qū)間為8.2-264.7 μg/L。 合作需求 1、尋求在水環(huán)境監(jiān)測系統(tǒng)研發(fā)、生產(chǎn)和銷售及運營服務(wù)的企業(yè)開展技術(shù)研發(fā)合作； 2、尋求在生態(tài)環(huán)境、水利、市政等政府部門或事業(yè)單位及受環(huán)保部門重點監(jiān)管的污染源企業(yè)的環(huán)境監(jiān)測相關(guān)應(yīng)用場景對接資源。

本試劑盒可用于牛結(jié)核病的流行病學(xué)調(diào)查、監(jiān)測、控制、凈化與根除。該試劑盒檢測靈敏度高、特異性好，與國外進(jìn)口 BOVIGAM?試劑盒的檢測總符合率達(dá)到 95.33%，同時與進(jìn)口試劑盒相比價格便宜，適于我國臨床牛結(jié)核病檢疫的大規(guī)模推廣使用，具有十分廣闊的應(yīng)用前景和經(jīng)濟(jì)價值。

可以量產(chǎn)/n該成果利用純化的乙型腦炎病毒，建立了ELISA抗體檢測試劑盒。該成果主要用于豬的乙型腦炎病毒抗體檢測，可以評價豬乙腦疫苗的免疫效果和感染監(jiān)測。

一、技術(shù)(成果)簡介 本項目組自1999年開始與美國夏威夷大學(xué)合作已經(jīng)開發(fā)出我國目前食品及環(huán)境中一些常見有毒殘留物的ELISA方法，這些有毒物質(zhì)包括對硫磷、甲基對硫磷、克百威、甲萘威、2，4-D、鹽酸克倫特羅、己烯雌酚、氯霉素、功夫菊酯、五氯硝基苯、呋喃唑酮、多氯聯(lián)苯等。ELISA方法的特異性好，對幾種有毒物的檢測靈敏度均達(dá)到ppb級，最低檢測限小于1ppb，該方法與傳統(tǒng)的儀器分析方法的相關(guān)性大于95%。檢測樣品只需進(jìn)行簡單的前處理，單個樣檢測用時短

本發(fā)明公開了基于納米抗體檢測甲萘威殘留的ELISA試劑盒及其應(yīng)用，所述試劑盒包括盒體、設(shè)在盒體內(nèi)的酶標(biāo)板以及試劑；其中，酶標(biāo)板的每個孔包被有甲萘威包被抗原，所述試劑包括抗甲萘威納米抗體、甲萘威標(biāo)準(zhǔn)溶液、酶標(biāo)記的二抗、緩沖液PBS、洗滌液PBST、底物液、顯色液和反應(yīng)終止液等。檢測過程中，酶標(biāo)板孔壁上吸附的包被抗原和待測甲萘威相互競爭與抗體反應(yīng)，通過顯色反應(yīng)觀察結(jié)果。檢測已知濃度的甲萘威并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，可以推算出待測甲萘威的濃度。本發(fā)明的優(yōu)點是能準(zhǔn)確靈敏地檢測水、蔬菜中甲萘威殘留，樣品的前處理過程簡單，耗時少，能同時檢測大量的樣品，樣品檢測成本遠(yuǎn)低于傳統(tǒng)的儀器檢測方法。

已有樣品/n豬肺炎支原體間接ELISA抗體檢測試劑盒及應(yīng)用。　　成果簡介：本發(fā)明用原核表達(dá)純化的豬肺炎支原體主要免疫原性膜蛋白P46和P65作為包被抗原，建立ELISA方法，并進(jìn)一步組裝成試劑盒。具有特異性強，靈敏度高，檢測時間短的特點，能夠及時、快速、大規(guī)模的監(jiān)測臨床上的豬肺炎支原體抗體，確定豬群感染動態(tài)，采取時效性強的藥物預(yù)防或免疫預(yù)防或管理措施。　　應(yīng)用前景：本發(fā)明的試劑盒能直接對豬肺炎支原體進(jìn)行檢測，具有特異性強，靈敏度高，檢測時間短的特點；操作簡單易行，不需由專業(yè)人員操作；其穩(wěn)定性好、保存