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中試階段/n該成果公開了一種GLI2基因作為豬初生重性狀相關分子標記及制備方法和應用，其步驟：A、用豬序列為模板設計引物，提取豬基因組DNA。1）將豬的肌肉組織在液氮中磨碎；2）將消化后的組織樣加入等體積的Tris飽和酚，冷凍；3）加等體積的苯酚/氯仿/異戊醇，轉移另離心管中；4）加入等體積的氯仿/異戊醇，冷凍，離心；5）將上清液吸入標記好的離心管中，加入無水乙醇；6）用槍頭將DNA沉淀挑出，加入純水溶解DNA；7）在DNA濃度測定儀上測定其濃度，紫外燈下檢測提取的DNA質量；B、設計引物，獲得所示

項目背景：1.夾層玻璃是由兩片或多片玻璃，之間夾了一層 或多層有 PVB 膜，經過特殊的高溫預壓及高溫高壓工藝處理后， 使玻璃和中間膜永久粘合為一體的復合玻璃產品。2.夾膠玻璃因 其所具有的安全性、防盜性、隔音型、防紫外線、節能等性能廣 泛應用于國內外汽車安全玻璃、建筑安全玻璃、太陽能光伏等領 域。 所需技術需求簡要描述：1.PVB 膜片：①汽車前擋風玻璃用 夾層 PVB 膜的抗穿透性。試樣規格 2mm 玻璃+0.76mm 膠片+2mm 玻 璃，300mm*300mm.用 2260 克的鋼球在一定高度自由落體砸玻璃， 目前可以承受 3.5 米高度，目標需求膠片可以承受 4.2 米高度； ②汽車前擋風玻璃用夾層 PVB 膜的低溫抗沖擊性。試樣規格 2mm 玻璃+0.76mm 膠片+2mm 玻璃，尺寸 300mm*300mm，在零下 20 攝 氏度條件下，用 227 克鋼球在一定高度以自由落體方式砸玻璃， 目標需求可以承受 11 米高度。2.聚乙烯醇縮丁醛“PVB”：聚乙 烯醇縮丁醛的生產過程中第一步 PVA+丁醛的縮合反應，目前是 采用鹽酸作為催化劑。尋找替代鹽酸的催化劑或者無催化劑的方 法，要求替代材料低成本且無污染。  對技術提供方的要求:具有開展項目研發的能力及人員設備支持，以及驗證和判斷的科研能力，能夠提供完整的解決方案。 

本品能有效祛除面部細菌和堵塞毛孔雜質，清熱解毒，對已經生成的痘痘加速痊愈，防止痘印形成。可改善面部肌膚，有效修復角質層，深層補水，平衡油脂分泌，促進新陳代謝，從根源抑制痘痘再生，促進痘印修復改善色素沉著，緊致細膚已達到治療功效。手感良好，體質均勻，粘度合適，具有親和性，易于在皮膚上鋪展和分散，膚感潤滑。使用時清涼舒適，使用后皮膚清爽不油膩。臨床研究有效率達80%，治療效果良好。已完成面膜基質的制作，涂布厚度、載藥量、吸收度都符合要求。正在進行基質優化，以及制作工藝流程的優化。

將果蔬中的生物活性成分高效提取后（或者各種果蔬超微粉）添加到面條、 面包、饅頭等食品中，開發系列具有降血壓、降血糖、提高免疫力等功能性的 食品。 

【項目來源】江蘇高校優勢學科“中藥學國家一級學科”建設工程資助開放課題“文蛤及其下腳料的深加工研究”，編號：PAPD（ysxk-2010）。【類    別】 功能性保健品（營養補充劑）。【劑    型】固體飲料、顆粒、咀嚼片、含片、口服液。【功能主治】補鈣、改善學習記憶障礙、增強免疫功能。【處方來源】文蛤是江蘇省沿海海域的優勢貝類生物資源。項目主要針對以文蛤肉及其加

泛素-蛋白酶體體系（Ubiquitin-Proteasome System，簡稱UPS）是細胞內最重要的蛋白質降解通路，對維持生物體內蛋白質的濃度平衡，以及對調控蛋白、錯誤折疊或受到損傷的蛋白的快速降解起著至關重要的作用，參與了細胞周期、基因表達調控等多種細胞進程，由UPS失常引發的蛋白質新陳代謝異常與眾多人類重大疾病直接相關。2004年，Aaron Ciechanover, Irwin Rose和Avram Hershko三位科學家被授予了諾貝爾化學獎，以表彰他們對該降解通路的發現。UPS中蛋白酶體是細胞中最基本的、最重要的不可或缺的、最為復雜的大型全酶超分子復合機器之一，人源蛋白酶體全酶包含至少33種不同的亞基，總原子質量約為2.5MDa。美國FDA批準的多種治療癌癥的藥物分子即以蛋白酶體為直接靶標。近年來，隨著冷凍電鏡技術的發展和應用，人們對這一大分子機器的結構和功能研究得以不斷深入。2016年，毛有東課題組與合作者報道了人源蛋白酶體基態的3.6?冷凍電鏡結構及其他三個亞納米分辨構象，并首次發現一個亞穩態構象的核心顆粒（Core Particle，簡稱CP）底物轉運通道處于開放狀態（見PNAS 2016, 113: 12991-12996）。2018年4月，該課題組又報道了6個ATPγS結合狀態下的26S動態結構，包括三個CP開放態對應的亞穩簡并態近原子分辨（4~5?）結構（見Nature Communications 2018, 9: 1360）。盡管這些工作揭示了蛋白酶體的基本架構和內在運動行為，但由于缺乏蛋白酶體與底物之間的相互作用，人們對于蛋白酶體如何實現底物降解的原子水平工作機制仍一無所知。此外，盡管冷凍電鏡技術近年來廣泛應用于分析具有動態特征的蛋白復合體結構和平衡態構象，但對其中間態結構和非平衡構象分析的分辨率水平往往局限在4～6埃或更低，離真正的全原子水平動力學分析還有相當一段距離。 為了真正實現原子水平的蛋白酶體底物降解動態過程的冷凍電鏡三維重建和動力學表征，毛有東課題組攻克了兩大技術難題。其一，如何在蛋白酶體完成底物降解之前抓到它的所有可能的中間態構象？課題組發展了一種新穎的核酸置換法，利用ATPγS降低AAA-ATPase激酶水解活性的特點，在底物降解中間過程，通過將ATP快速置換成ATPγS，結合快速冷凍的優勢，從而撲捉到蛋白酶體在底物降解過程的中間態。其二，如何在從冷凍電鏡數據中分析出更多構象的同時，還把分辨率做到3埃甚至更好？課題組通過多年持續努力，發展了多種基于人工智能和機器學習的冷凍電鏡圖像聚類的新型算法，并針對蛋白酶體的動力學特征，設計了一套極其有效的整合了多種算法的多構象分類流程。通過這兩套技術方案的完美結合，課題組成功解析了人源蛋白酶體在降解底物過程中的七種不同的、但差別甚微的、高分辨原子水平的天然態構象（Native states），完整展示了蛋白酶體從泛素結合到去泛素化，再到底物轉運的動態過程。與同期在Science上發表的與底物結合的酵母蛋白酶體的4.2-4.7埃冷凍電鏡結構（Science doi: 10.1126/science.aav0725，來自加州伯克利分校和Scripps研究所）相比，該Nature論文不僅總構象數量多一倍，全部構象分辨率還高1-2埃。由于Science論文采用了抑制Rpn11去泛素活性的策略，其非天然態結構中底物并不能真正自由轉運，所推測的機理僅限于底物轉運這一步，對于其他三大Nature論文所回答重要問題均無法給出答案。這體現了該Nature論文不僅在實驗方法的原創性上和數據分析水平和質量上，更在科學發現和問題探究的深度和廣度上大幅超越了來自Science的競爭性論文。圖一 七個利用冷凍電鏡解析的精細原子結構完整揭示了從泛素識別、去泛素化反應、轉運啟動和持續降解的核心功能動態過程。 作為整個蛋白酶體的動力來源與運轉核心，AAA-ATPase激酶分子馬達展現出了三種不同的核苷酸水解協作模式，6個ATPase亞基協調工作，交替與底物發生相互作用。在去泛素化過程（EB態）中，處于對立位置的兩個ATPase亞基Rpt2與Rpt4水解ATP，而Rpt5與Rpt6則釋放ADP，ATPase內的底物轉運通道被打開，使得底物可以進入軸心通道；與此同時，去泛素化酶Rpn11亞基與泛素及底物發生相互作用，執行其作為去泛素化酶的功能；在轉運起始過程（EC態）中，相鄰的兩個ATPase亞基Rpt1與Rpt5會同時水解ATP，調控顆粒（Regulatory Particle，簡稱RP）發生大規模轉動并釋放泛素；在底物去折疊與轉運過程（ED態）中，三個相鄰的ATPase亞基會分別同步進行ATP的結合、ADP的釋放與ATP的水解，這一過程會單向傳遞下去，將ATP水解釋放的化學能轉換為機械能，使得相應的ATPase亞基發生剛體轉動，推動底物的去折疊和單向輸運，同時CP的轉運通道入口打開，底物被送入通道中進行降解。這些研究結果為幾十年來對蛋白酶體功能的研究提供了寶貴的第一手原子結構和動力學信息，對于理解生物體內蛋白質的降解過程和一系列負責物質輸運的ATPase馬達分子的一般工作原理具有極為重要的科學意義。