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研發(fā)階段/n基于基因組定點(diǎn)編輯分子育種新技術(shù)及其配套軟件。　　成果簡介：本成果含有完整的基于CRISPR/Cas系統(tǒng)介導(dǎo)的基因組定點(diǎn)編輯技術(shù)，我們對基因組編輯技術(shù)切割活性和脫靶效應(yīng)進(jìn)行了優(yōu)化，開發(fā)了完整的sgRNA設(shè)計(jì)，sgRNA表達(dá)載體構(gòu)建，細(xì)胞或在體水平基因組打靶和脫靶檢測等技術(shù)。提高基因組定點(diǎn)打靶效率和降低脫靶風(fēng)險(xiǎn)，為基因組定點(diǎn)編輯技術(shù)應(yīng)用于動(dòng)植物分子育種打開了新的局面。本成果擁有自主知識產(chǎn)權(quán)的基因組編輯技術(shù)配套軟件，其適用于針對不同物種基因組設(shè)計(jì)和篩選活性高，特異性強(qiáng)的sgRNA用于動(dòng)植物分

全面開發(fā)了生脈散抑制 ras 原癌基因過表達(dá)中 的新用途，具體涉及在制備抑制 ras 原癌基因過表達(dá)的抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。

本研究的對象為來自海洋真菌代謝產(chǎn)物的命名為Xyloketals的系列化合物，其結(jié)構(gòu)新穎，體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明 Xyloketal B有突出的防治動(dòng)脈粥樣硬化的作用，與陽性藥辛伐他汀相比其作用更明顯，同時(shí)表明Xyloketal B 具有降壓、逆轉(zhuǎn)心肌肥厚的療效，在抗動(dòng)脈粥樣硬化作用的同時(shí)具有保護(hù)靶器官的作用，相對于目前臨床 用藥更有優(yōu)越之處。 在作用機(jī)制的研究中發(fā)現(xiàn)本化合物具有極強(qiáng)的抗氧化應(yīng)激、調(diào)控鈣內(nèi)流、促NO生成、保護(hù)血管內(nèi)皮 損傷和抗缺血缺氧特性。急性毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)xyloketal B毒性非常低，給小鼠單次口服、靜脈注射或腹腔 注射給藥，Xyloketal B的最大耐受劑量>1.4g/Kg(該劑量為降壓及抗心肌肥厚治療劑量的100倍)，極有可能發(fā) 要的作用。因此，防止血小板粘附聚集功能已經(jīng)成為防治動(dòng)脈粥樣硬化性疾病和血栓性疾病的重要靶標(biāo)之 展成為突出的防治心腦血管疾病的藥物。 一。三七屬于五加科植物，是我國一味傳統(tǒng)中藥。三七具有活血化瘀、消腫定痛的功能。研究已證實(shí)三七 皂苷是其發(fā)揮一系列功能的主要活性成分。我們本次研究成果發(fā)現(xiàn)，三七皂苷Rb2和Rd2可以抑制血小板 活化、粘附和聚集功能，

【發(fā) 明 人】郭立瑋；楊進(jìn)；卞慧敏；龔婕寧；劉陶世【技術(shù)領(lǐng)域】本發(fā)明涉及一種治療呼吸系統(tǒng)病毒感染性疾病的中藥制劑，屬中藥領(lǐng)域。【摘要】本發(fā)明涉及一種治療呼吸系統(tǒng)病毒感染性疾病的中藥制劑，由原料藥金銀花1-12重量份，白僵蠶1-6重量份，蟬蛻1-6重量份，生地1-12重量份，黃芩1-6重量份，黃連1-6重量份，黃柏1-6重量份制成，配伍藥物上可接受的輔料，制成糖漿劑、顆粒劑、膠囊劑、軟膠囊劑或片劑等各種口服劑型。本中藥運(yùn)用中醫(yī)學(xué)“扶正祛邪”和“養(yǎng)陰托邪”理論組方而成，體現(xiàn)了“祛邪務(wù)早、透邪外解和預(yù)護(hù)其虛”的指導(dǎo)思想；對人體免疫功能具有明顯調(diào)節(jié)作用，能促進(jìn)淋轉(zhuǎn)，增加抗體，增加淋巴細(xì)胞DNA合成和IL-2的產(chǎn)生，同時(shí)又有類似腎上腺皮質(zhì)繳素的作用，對許多病毒性疾病初起時(shí)免疫功能抑制的病理有很好的作用。

本成果屬于很少見的彌足寶貴的“腦心同治”的發(fā)明專利。心腦血管疾病和癌癥一直是人類健康的第一大殺手，患病人群與死亡率都居高不下，一直是各國藥企追逐的熱點(diǎn)，也是我國廠家企盼的品種。但縱觀我國所開發(fā)的相關(guān)品種，單治腦血管或單治心血管的多，而“腦心同治”的品種極少。然而，在臨床就診的腦血管與心血管疾病患者中，腦血管病和心血管病兼有是臨床十分常見的癥狀，二者亦相互影響，并且互為誘因。因此，開發(fā)對腦血管病和心血管病同時(shí)產(chǎn)生效應(yīng)的藥物非常必要。 二是本成果避免了其他中西品種都具有的較嚴(yán)重毒副作用。目前，針對腦血管和心血管疾病，西醫(yī)多采用強(qiáng)心、利尿及擴(kuò)張血管等藥物治療，但這類藥物長期使用會(huì)對人體帶來嚴(yán)重的毒副作用，如以硝酸甘油為代表的硝酸甘油類制劑為目前心血管疾病常用藥，但是此類藥物具有較大的副作用，例如出現(xiàn)頭痛、面紅、耳鳴、眩暈、血壓下降、心動(dòng)過速等，長期使用會(huì)產(chǎn)生耐藥性，另外青光眼、腦出血、顱內(nèi)高壓患者必須忌用。 那么，現(xiàn)有的中成藥品種有沒有副作用呢？當(dāng)然也有。在臨床上也已有一些治療腦血管或治療心血管疾病的中成藥，但其中很多都屬于“救急”的品種。很多“救急”的藥物，都有較嚴(yán)重的毒副作用，西藥最甚，中成藥也不例外，只可用于“救急”，而不宜長久服用，然而所有患者卻都需長期服藥，其中絕大多數(shù)患者還需終身服藥。如治療冠心病的冠心蘇合丸即含有乳香、冰片、青木香、檀香、蘇合香油等成分；另一品種復(fù)方丹參片也含有冰片等。這些芳香藥成分很耗傷人體氣血津液，久服對病情反而不利。但是，我們合作的品種（專利）卻幾乎沒有任何毒副作用。同時(shí)，腦血管與心血管疾病在急救之后，需要繼續(xù)采取有效的治療，并且，在“救急”之后就必須盡快跟進(jìn)的繼續(xù)治療，才是最重要的、治本的治療，而在臨床上，恰恰西藥缺乏這方面的有效品種，而相關(guān)的中成藥也不常見，特別是同時(shí)治療腦血管與心血管疾病的中成藥和西藥更是嚴(yán)重缺乏（我們的專利品種則是適于馬上跟進(jìn)繼續(xù)治療，可長期服用的“長效品種”）。 三是本成果具有較好的臨床療效。當(dāng)然，“療效”并不等同于“治愈”，這一點(diǎn)須首先要說清楚。本成果（專利）中組方的很多藥味，大多是經(jīng)過多年臨床反復(fù)驗(yàn)證過對“腦心血管病”卓有療效的品種（但其中水蛭必須用吸血水蛭，否則便沒有療效——水蛭專家多次試驗(yàn)證明只有吸血水蛭才含有有效成分）。

本發(fā)明提供了一種檢測牛APAF1基因隱性致死突變的方法，涉及分子生物學(xué)領(lǐng)域，本發(fā)明方法基于焦磷酸測序技術(shù)，采用一對擴(kuò)增引物、一條通用引物和一條測序引物，其核苷酸序列如SEQ?ID?No.1、2、3、4所示，對牛5號染色體63150400bp位點(diǎn)的單核苷酸多態(tài)性進(jìn)行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)牛APAF1基因野生型純合子在C堿基處有峰，T堿基處無峰；而致死突變攜帶者在C堿基與T堿基處均有峰。本發(fā)明提供的方法操作簡單，靈敏度高，準(zhǔn)確性強(qiáng)，通量高，檢測成本低，可快速檢測APAF1基因隱性致死突變攜帶者的個(gè)體，在牛的育種過程中具有重要應(yīng)用價(jià)值。

本發(fā)明公開了蛋白質(zhì)nog1在調(diào)控植物產(chǎn)量和/或穗粒數(shù)中的應(yīng)用。所述蛋白質(zhì)nog1為氨基酸序列是序列表中序列2所示的蛋白質(zhì)；所述產(chǎn)量為單株產(chǎn)量；所述穗粒數(shù)為主莖穗粒數(shù)。實(shí)驗(yàn)證明，向Guichao 2中導(dǎo)入抑制所述蛋白質(zhì)nog1表達(dá)的物質(zhì)，得到轉(zhuǎn)基因植物乙；與Guichao 2相比，轉(zhuǎn)基因植物乙的單株產(chǎn)量減少和/或主莖穗粒數(shù)減少。將編碼蛋白質(zhì)nog1的核酸分子導(dǎo)入SIL176中，得到轉(zhuǎn)基因植物甲；與SIL176相比，轉(zhuǎn)基因植物甲的單株產(chǎn)量增加和/或主莖穗粒數(shù)增加。因此，蛋白質(zhì)nog1對調(diào)控水稻產(chǎn)量和穗粒數(shù)具有非常重要的作用。

項(xiàng)目成果/簡介:本發(fā)明提供茶樹咖啡堿合成酶基因啟動(dòng)子TCSP及其在制備轉(zhuǎn)基因植物中的應(yīng)用.本發(fā)明以茶樹DNA為模板,用GenomeWalking方法克隆得到茶樹TCS基因啟動(dòng)子序列,然后利用Gateway技術(shù)構(gòu)建重組植物表達(dá)載體pKGWFS7TCSP,采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的煙草遺傳轉(zhuǎn)化,以表達(dá)GUS基因的方式進(jìn)行啟動(dòng)子活性功能驗(yàn)證.本發(fā)明首次從茶樹中克隆出特異性咖啡堿合成酶基因啟動(dòng)子TCSP,并驗(yàn)證了其活性,對于揭示茶樹咖啡堿合成的機(jī)理,生物調(diào)控茶樹咖啡堿的含量具有重要意義.

高溫、低溫和鹽堿脅迫已成為限制作物生產(chǎn)和植物生長發(fā)育的重要環(huán)境因子。本項(xiàng)目歷時(shí)14年，以重要作物棉花和模式植物擬南芥為材料，將基因挖掘、機(jī)理探索與利用緊密結(jié)合，分離鑒定了多個(gè)溫度和高鹽脅迫應(yīng)答基因、高效特異表達(dá)啟動(dòng)子及基因表達(dá)調(diào)控元件，探討了其調(diào)控機(jī)制，為作物遺傳改良提供了新基因資源和理論支撐。①發(fā)現(xiàn)了高溫誘導(dǎo)的miRNA可變剪切新機(jī)制，探討了低溫脅迫下GhDREB1與激素的調(diào)控關(guān)系，為闡明植物應(yīng)答溫度脅迫的分子機(jī)理提供了新證據(jù)。②解析了GhZFP1、GhMT3a和GhNHX1等基因在植物高鹽脅迫適應(yīng)中通過調(diào)節(jié)Na+積累和清除活性氧發(fā)揮作用，為作物抗逆品種改良提供了重要基因資源。③發(fā)掘并鑒定了植物組織特異高效啟動(dòng)子和調(diào)控元件，闡明了核基質(zhì)結(jié)合序列在提高遺傳轉(zhuǎn)化效率和轉(zhuǎn)基因表達(dá)水平方面的作用，為植物遺傳轉(zhuǎn)化提供了有效表達(dá)載體。本成果在Molecular Cell等國內(nèi)外學(xué)術(shù)刊物發(fā)表論文71篇，其中SCI論文62篇；總影響因子235，影響因子5以上論文15篇，單篇最高影響因子15.28，他引總計(jì)2227次。高溫誘導(dǎo)的miRNA可變剪切闡明了環(huán)境脅迫與植物miRNA加工的調(diào)控關(guān)系，是本領(lǐng)域研究的重大發(fā)現(xiàn)，在國內(nèi)外產(chǎn)生了較大影響，為提升我國在該領(lǐng)域研究的國際影響力發(fā)揮了積極作用。

本發(fā)明提供茶樹咖啡堿合成酶基因啟動(dòng)子TCSP及其在制備轉(zhuǎn)基因植物中的應(yīng)用.本發(fā)明以茶樹DNA為模板,用GenomeWalking方法克隆得到茶樹TCS基因啟動(dòng)子序列,然后利用Gateway技術(shù)構(gòu)建重組植物表達(dá)載體pKGWFS7TCSP,采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的煙草遺傳轉(zhuǎn)化,以表達(dá)GUS基因的方式進(jìn)行啟動(dòng)子活性功能驗(yàn)證.本發(fā)明首次從茶樹中克隆出特異性咖啡堿合成酶基因啟動(dòng)子TCSP,并驗(yàn)證了其活性,對于揭示茶樹咖啡堿合成的機(jī)理,生物調(diào)控茶樹咖啡堿的含量具有重要意義.