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本發(fā)明公開了一種蔗糖合成酶在調(diào)控植物果實(shí)發(fā)育中的應(yīng)用。本發(fā)明提供了一種培育轉(zhuǎn)基因植物的方法，是將蔗糖合成酶的編碼基因?qū)肽康闹参镏校玫睫D(zhuǎn)基因植物；所述轉(zhuǎn)基因植物果實(shí)產(chǎn)量大于所述目的植物。所述蔗糖合成酶的編碼基因具體可為蔗糖合成酶基因CsSus4。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)了蔗糖合成酶基因CsSus4在黃瓜果實(shí)發(fā)育過(guò)程中發(fā)揮著的關(guān)鍵性作用，可以調(diào)節(jié)庫(kù)強(qiáng)從而促進(jìn)果實(shí)的

團(tuán)隊(duì)發(fā)現(xiàn)了一種結(jié)瘤因子水解酶 （MtNFH1），它雖然缺乏幾丁質(zhì)酶活性，但是能夠特異地水解來(lái)自苜蓿中華根瘤菌中的結(jié)瘤因子，表明了MtNFH1對(duì)于結(jié)瘤因子具有更高的偏好性。在這篇文章中，Staehelin教授團(tuán)隊(duì)研究了結(jié)瘤因子水解酶（MtNFH1）在共生中的作用。研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)接種苜蓿中華根瘤菌時(shí)，結(jié)瘤因子水解酶積聚在侵染腔中表達(dá)。截形苜蓿結(jié)瘤因子水解酶突變體研究發(fā)現(xiàn)，在突變體中根瘤菌入侵呈現(xiàn)延遲的現(xiàn)象，說(shuō)明過(guò)量的結(jié)瘤因子會(huì)抑制侵染線的形成。結(jié)瘤實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，突變體早期根瘤呈現(xiàn)根瘤肥大和分支狀（二分體或掌狀-珊瑚狀）。同時(shí)，根瘤的分支狀表型也分別出現(xiàn)在結(jié)瘤因子水解酶過(guò)表達(dá)植株和野生型植物接種結(jié)瘤因子過(guò)表達(dá)菌株中。因此，結(jié)瘤因子水解酶對(duì)于結(jié)瘤因子濃度的精準(zhǔn)調(diào)控是根瘤菌入侵根毛以及成熟根瘤形態(tài)發(fā)生所必需的。

（1）針對(duì)氧化還原酶在對(duì)映選擇性和催化活性等方面的適用局限性問(wèn)題，建立分子改造與基因組挖掘技術(shù)平臺(tái)。通過(guò)理性設(shè)計(jì)改造野生型酶，改善和強(qiáng)化酶的催化特性與功能，獲得具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的高活性、高立體選擇性制備芳基手性醇的重組氧化還原酶及新基因，拓展了酶的適用性，并為進(jìn)一步認(rèn)識(shí)酶分子催化機(jī)制奠定基礎(chǔ)； （2）建立了高效穩(wěn)定全細(xì)胞催化的(S)-苯基乙二醇公斤級(jí)制備體系，在 100L 罐中，將底物濃度從 15 g/L 提高到 25 g/L，獲得了生產(chǎn)規(guī)模放大和產(chǎn)物的高效提取與精制等重要研究成果。產(chǎn)物光學(xué)純度和產(chǎn)率分別達(dá)到 99%和 93%。最終產(chǎn)物收率為 85%； （3）以數(shù)種手性醇酸化合物(R)-苯基乙二醇、(S)-間氯苯基乙二醇、(R)- 扁桃酸、(R)-2-辛醇為模型產(chǎn)物，通過(guò)生物催化劑篩選、理性設(shè)計(jì)催化過(guò)程、合理修飾底物和采用原位分離策略等，大大提高微生物不對(duì)稱還原潛手性化合物的效率，為手性化合物的制備提供了高效、安全的生物途徑。

本項(xiàng)目從白酒大曲中分離篩選出具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的高效脂肪酶生產(chǎn)菌華根霉，建立了利用華根霉全細(xì)胞脂肪酶在非水相中催化合成以己酸乙酯為代表的短鏈芳香酯技術(shù)體系，并實(shí)現(xiàn)了產(chǎn)業(yè)化。此方法反應(yīng)條件溫和、反應(yīng)特異性強(qiáng)、有毒副產(chǎn)物少、反應(yīng)效率更高；轉(zhuǎn)化產(chǎn)物品質(zhì)高，合成的短鏈的脂肪酸酯主要包括己酸乙酯、戊酸乙酯、庚酸乙酯、辛酸乙酯等，屬于天然等同生物香料，具有巨大的市場(chǎng)需求和商業(yè)價(jià)值。相關(guān)技術(shù)成果 2006 年獲江蘇省科技進(jìn)步一等獎(jiǎng)，2003 年獲教育部提名國(guó)家技術(shù)進(jìn)步二等獎(jiǎng)。

本發(fā)明公開了一種從花椒內(nèi)生耐寒短桿菌發(fā)酵液中制備L-酪氨酸的方法，其特點(diǎn)是將花椒內(nèi)生耐寒短桿菌于溫度30℃恒溫培養(yǎng)活化24h后，接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中，于溫度28～37℃，120～180r/min水浴中恒溫振蕩發(fā)酵培養(yǎng)24～72h；將發(fā)酵液在常溫下以4000～6000r/min的速度離心15min后除去菌體獲得上清液冷凍干燥；按樣品與Sephadex LH-20質(zhì)量比1:20～50且上樣量為柱體積的20％將發(fā)酵液過(guò)Sephadex LH-20層析柱，用100mL純水等度洗脫，按每份收集量20mL等份收集洗脫液F1～F5；將組分F3用制備型液相色譜儀進(jìn)行分離純化，冷凍干燥即得到L-酪氨酸，得率為8～15mg/L發(fā)酵液。

本發(fā)明涉及一種具抗癌活性的昆布氨酸希夫堿同雙核配合物的合成及其藥物組合物，包括：(1)疊氮橋聯(lián)昆布氨酸縮2?吡啶甲醛希夫堿銅同雙核配合物的合成；(2)疊氮橋聯(lián)昆布氨酸縮2?吡啶甲醛希夫堿鋅同雙核配合物的合成；(3)硫氰酸根橋聯(lián)昆布氨酸縮2?吡啶甲醛希夫堿鉑同雙核配合物的合成；(4)疊氮橋聯(lián)昆布氨酸縮3，5?二溴水楊醛希夫堿銅同雙核配合物的合成；(5)草酸根橋聯(lián)昆布氨酸縮3，5?二溴水楊醛希夫堿鉑同雙核配合物的合成，并針對(duì)上述化合物進(jìn)行藥理學(xué)分析研究。本發(fā)明化合物具抗癌活性作用，適合在抗癌領(lǐng)域中使用，具有較大的醫(yī)學(xué)和藥學(xué)價(jià)值，為抗癌藥物的研究開發(fā)和應(yīng)用推廣提供了一條重要的依據(jù)。該發(fā)明的有益效果在于：本發(fā)明提供了一種具抗癌活性的昆布氨酸希夫堿同雙核配合物的合成及其藥物組合物的合成方法，并進(jìn)行了藥理學(xué)分析，證明該化合物的具抗癌活性作用，適合在抗癌領(lǐng)域中使用。本發(fā)明方法找到了一種新的藥物合成方法，具有較大的醫(yī)學(xué)和藥學(xué)價(jià)值，為抗癌藥物的研究開發(fā)和應(yīng)用推廣提供了一條重要的依據(jù)

項(xiàng)目成果/簡(jiǎn)介:本發(fā)明提供茶樹咖啡堿合成酶基因啟動(dòng)子TCSP及其在制備轉(zhuǎn)基因植物中的應(yīng)用.本發(fā)明以茶樹DNA為模板,用GenomeWalking方法克隆得到茶樹TCS基因啟動(dòng)子序列,然后利用Gateway技術(shù)構(gòu)建重組植物表達(dá)載體pKGWFS7TCSP,采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的煙草遺傳轉(zhuǎn)化,以表達(dá)GUS基因的方式進(jìn)行啟動(dòng)子活性功能驗(yàn)證.本發(fā)明首次從茶樹中克隆出特異性咖啡堿合成酶基因啟動(dòng)子TCSP,并驗(yàn)證了其活性,對(duì)于揭示茶樹咖啡堿合成的機(jī)理,生物調(diào)控茶樹咖啡堿的含量具有重要意義.

中國(guó)科大陳宇星教授、周叢照教授和孫林峰教授課題組合作闡明了金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）胞壁酸（WTA）翻轉(zhuǎn)酶TarGH轉(zhuǎn)運(yùn)WTA的機(jī)制和TarGH特異性抑制劑Targocil的抑制機(jī)制。該研究成果在線發(fā)表在微生物領(lǐng)域?qū)I(yè)雜志mBio上。耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）是主要的臨床致病菌之一，其引發(fā)的感染難以治愈甚至可能致死。由于近年來(lái)抗生素濫用，出現(xiàn)了對(duì)所有的β-內(nèi)酰胺類藥物都具有抗性的MRSA菌株。研究表明S. aureus細(xì)胞壁主要成分WTA是引起耐藥性的關(guān)鍵因素之一。在革蘭氏陽(yáng)性菌中，WTA是一類共價(jià)連接在肽聚糖上的陰離子多聚物。WTA在細(xì)菌分裂、生物膜形成、宿主定殖以及細(xì)菌感染等過(guò)程中起著重要作用。因此，WTA合成路徑中的關(guān)鍵酶是新型抗菌藥物的重要靶點(diǎn)。在S. aureus中，WTA合成前體是N-乙酰葡糖胺修飾的多聚核糖醇長(zhǎng)鏈，其通過(guò)共價(jià)鍵連接在錨定在細(xì)胞膜上的脂質(zhì)載體Und-PP上。該Und-PP連接的多聚核糖醇長(zhǎng)鏈前體先在細(xì)胞內(nèi)完成合成，最后通過(guò)ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白TarGH翻轉(zhuǎn)出細(xì)胞膜。作為最具潛力的抗生素靶標(biāo)之一，TarGH及其抑制劑得到廣泛研究。先導(dǎo)化合物小分子Targocil是近期被鑒定出來(lái)特異性抑制TarGH效率較高的抑制劑，但是其抑制的分子機(jī)制并不清楚。為闡明TarGH轉(zhuǎn)運(yùn)WTA的機(jī)理以及Targocil的抑制機(jī)制，作者用冷凍電鏡方法，解析了金黃色葡萄球菌WTA翻轉(zhuǎn)酶TarGH的同源蛋白，來(lái)自Alicyclobacillus herbarius菌的TarGH結(jié)構(gòu)。其同源性為50%。TarGH結(jié)構(gòu)總體分辨率為3.9 ?，其核心結(jié)構(gòu)區(qū)域分辨率達(dá)到3.6?。由于未結(jié)合ATP，TarGH結(jié)構(gòu)處于開口朝向細(xì)胞內(nèi)的構(gòu)象狀態(tài)。基于結(jié)構(gòu)，作者計(jì)算出了底物轉(zhuǎn)運(yùn)通道，通過(guò)對(duì)組成通道的氨基酸殘基性質(zhì)分析并結(jié)合生理實(shí)驗(yàn)，闡明了底物特異性識(shí)別機(jī)制。通過(guò)結(jié)構(gòu)比對(duì)作者提出TarGH及其同源蛋白利用“曲柄連桿”原理來(lái)實(shí)現(xiàn)底物轉(zhuǎn)運(yùn)的分子機(jī)制。具有類似結(jié)構(gòu)特點(diǎn)的ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白都可以利用這一機(jī)制通過(guò)相對(duì)微小的總體構(gòu)象變化轉(zhuǎn)運(yùn)較大的底物。作者進(jìn)一步通過(guò)生化實(shí)驗(yàn)和計(jì)算機(jī)模擬確定了Targocil結(jié)合TarGH的精確位點(diǎn)，并闡明了其抑制TarGH轉(zhuǎn)運(yùn)胞壁酸的分子機(jī)制。

"磷脂酶 D （PLD）是一類具有水解作用和磷酰基轉(zhuǎn)移作用的酶, 在磷脂改性方面發(fā)揮著重要作用。它可以將大量磷脂酰膽堿(PC) 催化合成為自然界稀有的磷脂質(zhì)，如磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰絲氨酸(PS)和磷脂酰甘油(PG)等，合成的磷脂質(zhì)在醫(yī)藥和食品工業(yè)具有很大的應(yīng)用前景。但由于來(lái)源不足和價(jià)格高，PLD的工業(yè)應(yīng)用一直受到限制。本項(xiàng)目通過(guò)基因工程和微生物發(fā)酵技術(shù)，解決了PLD工業(yè)化應(yīng)用中難表達(dá)和表達(dá)量不足的難題，利用重組大腸桿菌發(fā)酵實(shí)現(xiàn)了PLD的高水平表達(dá)，其酶活為106 U?L-1，產(chǎn)量為748 mg?L-1，分別比目前報(bào)道的最高水平提高了100倍和20倍；同時(shí)，本項(xiàng)目還建立了一種簡(jiǎn)單有效提取重組PLD的方法，可望大大降低PLD的生產(chǎn)成本。本技術(shù)先進(jìn)，應(yīng)用前景看好，如按106 U?L-1的發(fā)酵水平生產(chǎn)，成本約100元人民幣/1000 U，目前市場(chǎng)售價(jià)在3000-6000元/1000 U，利潤(rùn)空間很大。 "

其他成果/n本發(fā)明屬于飼料添加劑技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種α-半乳糖苷酶軟膠囊飼料添加劑及其制備方法。該方法包括以下步驟：1)向磷酸鹽緩沖溶液中加入α-Gal，然后加入β-CD，再經(jīng)過(guò)均質(zhì)后靜置反應(yīng)，至反應(yīng)終點(diǎn)，得到α-Gal—β-CD添加液；2)將B型明膠加入水中，充分溶脹后加入甘油、防腐劑和二氧化鈦，混合均勻進(jìn)行膠化，得到膠料；3)灌裝。通過(guò)本發(fā)明得到的軟膠囊添加劑利用環(huán)糊精抑制劑對(duì)α-Gal的抑制作用，使動(dòng)物飼料中的α-Gal酶活，經(jīng)歷一個(gè)先低后高的過(guò)程，從而使飼料中的α-Gal在更合適的消化時(shí)期發(fā)揮催化作用。