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本發(fā)明涉及一種綠盲蝽唾液酶中蛋白酶與纖維素酶的體外提取測定方法，利用Paraflim膜，采取膜夾營養(yǎng)法提取綠盲蝽唾液酶，并測定綠盲蝽中蛋白酶與纖維素酶的活性，Paraflim膜法提取綠盲蝽唾液酶利用Paraflim膜、膠卷盒、紗布、橡皮筋、位于兩層Paraflim膜間的液體營養(yǎng)介質(zhì)，利用酶與底物反應(yīng)的原理，測定綠盲蝽唾液中蛋白酶、纖維素酶的活性。本方法材料易得，操作簡單方便，制作成本低，占空間小，可實現(xiàn)綠盲蝽唾液酶的大量、批量提取，并且綠盲蝽可繼續(xù)回收利用。

磷脂酰絲氨酸（phosphatidylserine，PS），又稱二酰甘油酰磷酸絲氨酸，是一類普遍存在的磷脂，通常位于細(xì)胞膜的內(nèi)層，尤其是大腦細(xì)胞膜的重要組成成分之一。它能調(diào)控大腦的各項功能正常運作，起到調(diào)節(jié)血脂、改善記憶、健腦益智、以及延緩衰老等作用。但天然存在的磷脂酰絲氨酸很少，提取工藝繁雜， 并且安全性受到人們的質(zhì)疑。生物酶法制備磷脂酰絲氨酸具有反應(yīng)條件溫和、環(huán)境友好、產(chǎn)品質(zhì)量好等優(yōu)點，近年來受到越來越多的關(guān)注。本研究室通過基因工程手段，大腸桿菌中異源表達(dá)了磷脂酶 D 基因，以粗話生產(chǎn)磷脂酰絲氨酸。目前，該研究正在進(jìn)行蛋白質(zhì)工程改造及各項優(yōu)化，以提高底物轉(zhuǎn)化率。 

α-細(xì)辛腦（ARE，α-Asarone, 2, 4, 5-三甲氧基-1-丙烯基苯），是一種臨床上用于慢性阻塞性肺疾病（COPD）、肺炎、支氣管哮喘等呼吸系統(tǒng)疾病以及癲癇治療的藥物，但其口服生物利用度低（2～6%）。為了提高療效，臨床上通常以靜脈注射的方式給藥。然而由于其水溶性差（0.16mg/mL，35℃），為達(dá)到適當(dāng)?shù)娜芙舛龋惺?alpha;-細(xì)辛腦注射液中添加了較大量的吐溫-80，帶來的副作用是易引起過敏反應(yīng)（反應(yīng)率51.5%），并且由于其過敏反應(yīng)迅速、危害大，故存在很大安全隱患。因此，通過藥劑學(xué)的手段開發(fā)一種更安全的α-細(xì)辛腦注射液是非常必要的。本實驗室分別采用了磷脂/膽鹽混合膠束作為難溶性藥物的載體或BASF公司在中國注冊的Solutol HS 15替換吐溫80作為增溶劑，來改善α-細(xì)辛腦的溶解性能，將其制備成注射液。 目前我們已經(jīng)研究了細(xì)辛腦混合膠束(ARE-SPC-DC-MMs)的處方和制備工藝。由此制得的混合膠束呈類圓形，其細(xì)辛腦含量為 4.71 ± 0.16 mg/mL，比文獻(xiàn)報道中細(xì)辛腦在水中的溶解度提高了約30倍，膠束粒徑大小為24.74 ± 1.14 nm。 對研制的細(xì)辛腦混合膠束(ARE-SPC-DC-MMs)的體內(nèi)行為和致敏性進(jìn)行了研究：（1）以市售細(xì)辛腦注射液為對照(CA-AREs)，對ARE-SPC-DC-MMs的Wistar大鼠體內(nèi)藥動學(xué)和組織分布進(jìn)行了研究，兩者無明顯差異。(2) 進(jìn)行了豚鼠致敏性實驗，比較和評價了ARE-SPC-DC-MMs和CA-AREs的致敏性。通過觀察各組實驗豚鼠癥狀，測定其血清中組胺釋放水平，觀察各組動物肺臟和氣管的病理切片，來綜合評價ARE-SPC-DC-MMs的安全性。表明①癥狀方面陽性組在豚鼠激發(fā)后表現(xiàn)出明顯的過敏反應(yīng)。豚鼠表現(xiàn)為步態(tài)不穩(wěn)、痙攣等強陽性癥狀并且在5min內(nèi)死亡。而對于給藥CA-AREs組的豚鼠來說，有暈厥和步態(tài)不穩(wěn)的癥狀，但是未發(fā)現(xiàn)死亡。ARE-SPC-DC-MMs與生理鹽水組豚鼠未發(fā)現(xiàn)異常癥狀；②組胺水平方面，激發(fā)后陽性對照組與CA-AREs組中的血清組胺水平遠(yuǎn)高于陰性對照組和ARE-SPC-DC-MMs組(p<0.05)。ARE-SPC-DC-MMs組組胺釋放比市售組CA-AREs降低了17%。而對于ARE-SPC-DC-MMs組和陰性對照組來說，兩者并無顯著性差異(p>0.05)；③其病理切片觀察結(jié)果表明，激發(fā)后陽性組和市售CA-AREs組豚鼠肺部可見豚鼠肺泡大量融合，肺間質(zhì)有炎癥細(xì)胞浸潤，氣管黏膜上皮脫落。而對照組以及ARE-SPC-DC-MMs組的豚鼠肺泡均未見融合，間質(zhì)并無炎癥，氣管黏膜上皮未見脫落。上述實驗結(jié)果說明ARE-SPC-DC-MMs大大降低了致敏性。 綜上，ARE-SPC-DC-MMs有望成為市售細(xì)辛腦注射液的優(yōu)良替代品。

11月4日，天津大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院王濤課題組在Journal of Virology在線發(fā)表了最新研究成果，論文題目為“Enterovirus D68 Protease 2AproTargets TRAF3 to Subvert Host Innate Immune Responses”。 腸道病毒EV-D68（Enterovirus D68）可引起典型上呼吸道感染癥狀，同時還會誘發(fā)中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病，如急性弛緩性麻痹和急性無力脊髓炎等。近年來，我國對EV-D68的檢出率逐漸升高，存在大規(guī)模暴發(fā)的風(fēng)險。腸道病毒的非結(jié)構(gòu)蛋白2A蛋白酶（2Apro）是協(xié)助病毒逃避宿主天然免疫的關(guān)鍵蛋白。 王濤團隊發(fā)現(xiàn)在感染EV-D68后，2Apro可顯著抑制SEV誘導(dǎo)的Ⅰ型干擾素反應(yīng)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，2Apro能夠分別在HeLa和HEK293T細(xì)胞中切割TRAF3的C端區(qū)域，切割后得到的條帶大小為40 kDa左右。同時，2Apro中第107位氨基酸的半胱氨酸被丙氨酸取代后，喪失對TRAF3的切割活性，而TRAF3中第462位氨基酸甘氨酸突變?yōu)楸彼釙r，表現(xiàn)出對2Apro切割的抗性。 本研究發(fā)現(xiàn)了EV-D68的2Apro能夠切割宿主天然免疫通路中的TRAF3蛋白，從而破壞宿主的先天免疫應(yīng)答，并對2Apro和TRAF3切割的具體位點和機制做了詳細(xì)報道。

項目成果/簡介:11月4日，天津大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院王濤課題組在Journal of Virology在線發(fā)表了最新研究成果，論文題目為“Enterovirus D68 Protease 2AproTargets TRAF3 to Subvert Host Innate Immune Responses”。 腸道病毒EV-D68（Enterovirus D68）可引起典型上呼吸道感染癥狀，同時還會誘發(fā)中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病，如急性弛緩性麻痹和急性無力脊髓炎等。近年來，我國對EV-D68的檢出率逐漸升高，存在大規(guī)模暴發(fā)的風(fēng)險。腸道病毒的非結(jié)構(gòu)蛋白2A蛋白酶（2Apro）是協(xié)助病毒逃避宿主天然免疫的關(guān)鍵蛋白。 王濤團隊發(fā)現(xiàn)在感染EV-D68后，2Apro可顯著抑制SEV誘導(dǎo)的Ⅰ型干擾素反應(yīng)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，2Apro能夠分別在HeLa和HEK293T細(xì)胞中切割TRAF3的C端區(qū)域，切割后得到的條帶大小為40 kDa左右。同時，2Apro中第107位氨基酸的半胱氨酸被丙氨酸取代后，喪失對TRAF3的切割活性，而TRAF3中第462位氨基酸甘氨酸突變?yōu)楸彼釙r，表現(xiàn)出對2Apro切割的抗性。 本研究發(fā)現(xiàn)了EV-D68的2Apro能夠切割宿主天然免疫通路中的TRAF3蛋白，從而破壞宿主的先天免疫應(yīng)答，并對2Apro和TRAF3切割的具體位點和機制做了詳細(xì)報道。

木塑復(fù)合材料(wood-plastics composites,簡稱WPC)是利用熱熔塑膠（聚乙烯、聚丙烯、聚氯乙烯等以及它們的共聚物）作為膠粘劑,用木質(zhì)粉料（如木材、農(nóng)植物秸稈、農(nóng)植物殼類等生物質(zhì)物粉料）為填充料,經(jīng)擠壓法成型或壓制法、注塑法成型所形成的復(fù)合材料。木塑復(fù)合材料不僅具有原木特有的木質(zhì)感,而且它具有較好的機械性能、尺寸穩(wěn)定性好,耐水性、耐磨性、耐化學(xué)腐蝕性優(yōu)良,不怕蟲蛀,易于著色,維護(hù)要求低,使用壽命長,易于成型,可二次加工等眾多優(yōu)異性能。被廣泛的應(yīng)用到建筑、室內(nèi)潢、汽車、包裝、倉儲等領(lǐng)域代替木材使用；得到了廣泛應(yīng)用。 另外它還可充分利用回收木材、余料、木屑等原來被廢棄的木料,大幅度提高天然木材的利用率,并可解決廢棄木料所造成的垃圾污染及處理問題,具有保護(hù)環(huán)境,提高人造木材制品附加價值的功效，被譽為綠色環(huán)保新型材料,具有廣闊的發(fā)展前景。

成果描述：酶脫毛是一種公認(rèn)的制革脫毛清潔工藝，在中國的豬皮制革中獲得了成功的應(yīng)用，但一直沒有成功用于牛皮制造。已經(jīng)報道的牛皮的酶脫毛工藝通常是在35℃至42℃的較高溫度下進(jìn)行，由于組織及纖維結(jié)構(gòu)的差異，較高溫度下牛皮膠原纖維容易受到破壞，容易發(fā)生松面、毛孔擴大等質(zhì)量缺陷，甚至導(dǎo)致爛面等嚴(yán)重質(zhì)量事故，并且在該溫度條件下實施牛皮酶脫毛，工藝操作和控制難度極大。本技術(shù)提供了一種針對牛皮的低溫酶脫毛工藝，并且完全不使用硫化物。該工藝技術(shù)使用與之配套的脫毛酶制劑，能夠在較低溫度下對牛皮進(jìn)行脫毛處理，解決了長久以來本領(lǐng)域技術(shù)人員一直渴望解決但始終未獲得成功的牛皮酶脫毛制革的技術(shù)難題，并且產(chǎn)生的含蛋白廢水可以替代部分氮肥直接用于農(nóng)業(yè)或城市綠化的灌溉，低溫脫毛同時也節(jié)約了能源的消耗，降低了生產(chǎn)成本，提高了綜合效益。市場前景分析：牛皮制革廠。與同類成果相比的優(yōu)勢分析：國際先進(jìn)。

可以量產(chǎn)/n針對當(dāng)前工業(yè)發(fā)展對脂肪酶的大量需求與脂肪酶實際表達(dá)水平較低 的技術(shù)瓶頸，突破了脂肪酶超高效表達(dá)技術(shù)關(guān)鍵，建立了真菌脂肪酶高 效表達(dá)技術(shù)平臺，構(gòu)建的米根霉脂肪酶基因工程菌 10L 發(fā)酵酶活力可達(dá) 40,000U/ml 以上，為當(dāng)前報道的最高水平，具有極強的國際競爭力。產(chǎn) 品可用于油脂水解、轉(zhuǎn)酯，食品加工、烘焙，生物柴油制備，飼料添加 劑，再生紙脫墨等廣泛用途。建設(shè)其發(fā)酵生產(chǎn)線預(yù)計需要 800-1000 萬元，經(jīng)濟效益可觀。米根霉脂肪酶可用于油脂水解、轉(zhuǎn)酯，食品加工、烘焙，生物柴油

油脂精煉過程中，脫膠是非常重要的一步工序，脫膠效果的好壞直接影響到油脂精煉的效率和最終產(chǎn)品的質(zhì)量。傳統(tǒng)的脫膠方法常存在產(chǎn)品質(zhì)量不穩(wěn)定、消耗大、得率低、“三廢”排放量大等問題。酶法脫膠工藝是現(xiàn)代工業(yè)生物催化技術(shù)在傳統(tǒng)油脂行業(yè)中的應(yīng)用，是對現(xiàn)有化學(xué)或物理脫膠工藝的改進(jìn)，以提高其經(jīng)濟性和環(huán)保性，有著廣泛的發(fā)展前景和重要的經(jīng)濟和社會價值。本技術(shù)以自行篩選所得菌株BIT-18表達(dá)的磷脂酶為對象，開發(fā)了該磷脂酶在大豆油、菜籽油等常見油脂酶法脫膠中的應(yīng)用，已完成了實驗室工藝優(yōu)化，建立了適于工廠規(guī)模油脂酶法脫膠工藝

糖化酶是糖化工業(yè)的重要酶制劑，但生產(chǎn)上的主要問題是：酶活力低、沒有常溫條件下的酶產(chǎn)品（使得糖化工藝中需要消耗大量能源）。利用定向進(jìn)化技術(shù)獲取較低溫度下活力提高數(shù)倍~數(shù)十倍的新的酶分子、并確定新基因序列，轉(zhuǎn)化受體菌。 我們的技術(shù)優(yōu)勢：基因分離技術(shù)是我們的優(yōu)勢，已報道全長基因序列15條，在天津基金資助下最近已克隆了糖化酶基因。定向進(jìn)化是我們目前的主要研究方向之一，在留學(xué)回國科研啟動基金資助下對谷胱苷肽-S-轉(zhuǎn)移酶脫氯活性進(jìn)行提高，已有研究進(jìn)展。