植物RNA化學(xué)修飾m6A
                                        
                                            鑒定了擬南芥中的	m6A	去甲基酶	ALKBH10B	,發(fā)現(xiàn)	ALKBH10B	缺失會導(dǎo)致擬南芥顯著的晚花表型,	ALKBH10B	通過影響	FT	,	SPL3	和	SPL9	的甲基化水平調(diào)控擬南芥的成花誘導(dǎo)。不同的識別蛋白通過對	m6A	的結(jié)合,對	mRNA	的加工代謝產(chǎn)生不同的調(diào)控作用,	進(jìn)而	影響細(xì)胞不同的生理功能。通過開發(fā)甲醛交聯(lián)-	免疫共沉淀(Formaldehyde-crosslinking and immunoprecipitation, FA-CLIP)	技術(shù),鑒定出全轉(zhuǎn)錄組水平的ECT2-mRNA	相互作用位點(diǎn),揭示ECT2	主要結(jié)合mRNA	的	3'	非翻譯區(qū)(3'UTR),	并且傾向于結(jié)合保守序列	URUAY (R=G>A, Y=U>A, 	其中	UGUAY	序列 占	90%	以上	)	。使用植物細(xì)胞核裂解液進(jìn)行的體外酶活實(shí)驗和凝膠遷移實(shí)驗(	EMSA	)證明	UGUA	序列為	植物特有的m6A	保守序列,且UGUm6A	可以被ECT2	高特異性識別。亞細(xì)胞定位實(shí)驗表明ECT2	蛋白分布于細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì),結(jié)合高通量測序數(shù)據(jù)分析,推測ECT2	具有雙重功能,ECT2	可能在細(xì)胞核中通過結(jié)合甲基化的UGUA	調(diào)控pre-mRNA	的	3'UTR	加工,在細(xì)胞質(zhì)中ECT2	促進(jìn)mRNA	的穩(wěn)定性。進(jìn)一步機(jī)理研究發(fā)現(xiàn)影響表皮毛發(fā)育的三個基因ITB1, TTG1	及DIS2	的轉(zhuǎn)錄本可以被m6A	修飾且被ECT2	結(jié)合,在	ECT2	的T-DNA	插入突變體中,ITB1, TTG1	及DIS2	的mRNA	穩(wěn)定性降低,mRNA	表達(dá)量水平降低,繼而導(dǎo)致	ect2	突變體中表皮毛分叉數(shù)增多。
                                        
                                        
                                            北京大學(xué)
                                            2021-04-11