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茶葉是我國重要的農產品之一， 也是傳統的大宗出口商品。在茶葉種植中，以氯氝菊酣為主

低聚異麥芽糖作為一種健康糖源和功能性食品添加劑廣泛應用于醫藥、食品和飼料添加劑行業中。在低聚異麥芽糖的制備過程中，α-葡萄糖苷酶的轉糖苷作用是關鍵步驟。目前國內用于低聚異麥芽糖生產的α-葡萄糖苷酶大多為進口品。本項目獲得的?-葡萄糖苷酶生產菌株發酵液酶活達到 11 U/mL，為國內外現 有報道中的最高水平，發酵工藝簡單易控。重組菌發酵液經過濾除菌并濃縮后可以直接作為酶液進行轉化。酶轉化生產低聚異麥芽糖轉化率與進口酶相似，可以替代進口品。 

本項目針對上述問題，從分子、細胞和個體水平三個層面上研究人端粒酶逆轉錄酶(hTERT)生物學行為及相關技術的臨床應用，旨在提高兒童腫瘤療效。 1、主要科技內容和技術特點： 1） 率先在國內外建立RT-PCR和實時定量RT-PCR檢測hTERT法，該法簡便、快速、經濟、安全，適用于臨床推廣應用。該項技術已經應用于兒童惡性腫瘤診斷、監測和指導個體化治療，提高了兒童腫瘤的診療水平。 2）首次在國內外研究體內造血干細胞hTERT的生物學行為，證明了hTERT與促紅細胞生成素的關系，并系統研究了惡性腫瘤細胞hTERT的生物學行為， 探討腫瘤細胞中Aurora A與hTERT及端粒酶表達的相關性，提出hTERT與細胞因子網絡紊亂相互作用促進腫瘤發生和發展的新觀點，為惡性腫瘤在分子水平上的監測和以hTERT為靶點的生物工程治療提供了依據。 3） 在國內外首次闡明端粒酶重建對成纖維細胞遷移能力和生物節律的調控，把端粒酶、hTERT生物學行為和生物節律與腫瘤擇時治療有機結合，為腫瘤治療提供了一條新路徑。實踐證明，在該理論指導下進行化療，可明顯提高腫瘤化療效果，且毒副作用明顯減少。

成果與項目的背景及主要用途： 菌糠是指以棉籽殼、木屑、稻草、玉米芯、甘蔗渣及多種農作物秸稈、工業 廢料（如酒糟、醋糟、造紙廠廢液及制藥廠黃漿廢液等）為主要原料栽培食用菌 后的廢棄培養基。菌糠主要含有物質是纖維素、半纖維素、木質素、抗營養因子 和少量的蛋白質，這些原料作為培養基栽培食用菌后，通過食用菌菌體的生物固 氮作用、酶解作用等一系列生物轉化過程，粗蛋白質、粗脂肪含量均比不經過食 用菌發酵前提高二倍以上，纖維素、半纖維素、木質素等均已被不同程度的降解， 其中粗纖維素降低了 50%以上，木質素降低 30%以上，棉酚降低 60%以上，同 時還產生了多種糖類、有機酸類和生物活性物質。據報道，我國菌糠年產量在 200 萬噸以上大部分當作廢料而被浪費掉，給環境造成了很大的污染，一些菌糠 可以被用作畜禽飼料，并且用廢棄菌糠來改良土壤可以做到廢物利用、改善環境， 實現農業的可持續發展。 我國土壤絕大部分嚴重缺磷、缺鉀，化學肥料中的磷元素和鉀元素在施肥后 很快被固化，不再能夠被植物使用。解磷菌、解鉀菌及固氮菌是生物益生菌肥中 的主要菌株，使用這些土壤益生菌可以提高土壤中植物可利用氮磷鉀的利用率。 如果能夠利用廢棄菌糠大規模培養這三種菌，制備成為生物菌肥，將會極大的增 211天津大學科技成果選編 加菌糠做為肥料的優勢。本項目利用菌糠培養解磷菌、解鉀菌、固氮菌，制備成 為生物菌肥，預期產生極大的經濟效益和社會效益。 技術原理與工藝流程簡介： 本項目擬利用處理后的廢棄菌糠殘渣培養酵母、解磷菌、解鉀菌、固氮菌， 優化發酵條件，提高菌體量，獲得制備微生物菌肥的最佳工藝路線。 天津大學從農業廢棄物堆肥中篩選出 7 株解磷能力較強的菌株，其中菌株 FL7 表現出較好的解磷效果，FL7 解磷量為 436.63mg/L。該菌株已經于 2010 年 7 月 13 日在中國微生物菌種保藏中心進行保藏（保藏號：CGMCC NO.4008）。 本課題組還從農業廢棄物堆肥中篩選得到解鉀菌 K3、固氮菌 N1。解鉀菌 K3 解 鉀量達 4.10mg/L、固氮菌 N1 固氮量為 1.81×10—2mol/L。 另外，天津大學已經建立了以菌糠為基質培養解磷、解鉀、固氮菌的發酵條 件，經過發酵條件優化，制備的菌肥中三種菌的含量達到 48.62×108CFU/g，其 中解磷菌 2.4×108cfu/g，解鉀菌 25.22×108cfu/g，固氮菌 21×108cfu/g，均遠高于 國標。 應用領域：生物、農業領域 合作方式及條件：具體面議

有很高的食用和藥用價值，是我國傳統的藥用真菌之一。其鮮嫩醇香，肉 質細嫩、潔白如玉、口感獨特、生熟皆可食、食藥兩用、營養豐富。雞樅菌中 含有麥角甾醇類物質及治療糖尿病的有效成份，對降低血糖有明顯效果。并有 抑制人體癌細胞生長的作用。 

該研究發現RNA病毒感染宿主細胞可誘導表達一種新型自噬受體CCDC50，該自噬受體通過識別K63型泛素化修飾的RNA病毒模式識別受體RIG-I/MDA5（RLR）并介導后者的自噬途徑依賴的降解，從而抑制病毒感染誘導的I型干擾素的產生，幫助機體恢復到靜息狀態，避免過度免疫反應造成的組織損傷和自身炎癥。我校博士后侯盼盼為論文第一作者，郭德銀教授為通訊作者，我校醫學院、附屬第七醫院為第一作者單位。       天然免疫是一種非特異性的宿主抵抗病原微生物入侵的免疫反應,它廣泛存在于機體的絕大部分細胞，被認為是機體抵抗病原體感染的第一道防線。隨著近幾十年的研究，人們對天然免疫系統愈發了解，已經發現并鑒定出天然免疫反應的關鍵調控因子和信號轉導因子，然而某些重要調控因子的結構和功能機制依然不清楚，且這些調控因子的生理和病理作用尚有待于研究。郭德銀教授課題組利用CRISPR/Cas9第二代文庫在免疫細胞中進行了全基因組水平的大規模無偏差篩選，發現了一系列參與天然免疫反應調控的新型基因。進一步的驗證過程中發現CCDC50蛋白在RNA病毒感染下表達量顯著增加且其表達模式和RLR的表達模式一致，提示著CCDC50可能參與調控RLR介導的信號通路活性。為了進一步驗證該觀察結果，該課題組構建了CCDC50條件缺失的小鼠模型，攻毒實驗結果證明缺失CCDC50后，病毒感染條件下，I型干擾素表達上調，其下游的ISGs表達水平也隨之升高，小鼠清除病毒能力增強，肺部組織損傷和炎性浸潤減少，且小鼠存活率增加，從而證明CCDC50在機體水平具有生理學功能。       進一步的機制探究中，該課題組發現CCDC50特異性識別K63泛素化修飾的RLR，并促進激活的RLR的自噬途徑依賴的降解，此機制不同于以往了解較多的K48泛素化依賴的降解調控。該過程的發生并不依賴于常見的自噬受體p62， 因p62缺失后，CCDC50依然可以促進RLR的降解，但CCDC50可與p62協同作用。劉迎芳教授團隊解析了CCDC50分子LIR結構域和LC3復合體的晶體結構，結構分析證明CCDC50中存在一段非典型的LIR基序，該基序可以結合位于LC3的LDS結合位點，將K63泛素化修飾的RLR拉進自噬小體。有趣的是，緊鄰LIR基序，CCDC50有一段MIU基序，該基序可稱為反向UIM基序，體外生化實驗證實CCDC50-MIU可以結合在LC3的UDS位點，進而證明CCDC50是一種新型自噬貨物受體，可以以兩段不同的疏水基序結合在LC3的不同位點。這類自噬貨物受體是首次在生物體內被發現

本發明的目的在于提供了一種裝載具有干擾素誘導活性的聚肌胞苷酸，并加入殼寡糖作為佐劑的鴨疫里默氏菌菌影疫苗。該方案首先構建溫控表達載體，電轉化入鴨疫里默氏菌原生質體，篩選陽性克隆后28℃增菌培養，然后42℃誘導裂解基因的表達，待OD600不再降低時，加入聚賴氨酸繼續作用以充分裂解活菌，然后離心分離菌體。將干燥菌體與6mg/mL的聚肌胞溶液等比例混合，使聚肌胞包埋進入菌影內，然后加入2%殼寡糖水溶液攪拌形成均一的混合物，分裝于西林瓶，冷凍干燥，即得到鴨疫里默氏菌新型菌影疫苗。本發明所制備的菌影疫苗經飲水免疫，既可以刺激呼吸道和消化道黏膜的局部免疫，也可以激發體液免疫，對機體的保護效果與注射免疫無明顯差異。

CRISPR/Cas9 (clustered regularly interspaced short palindromic repeats and CRISPR-associated proteins)是目前最常用的基因編輯工具酶，在科研領域被廣泛應用，而在臨床方面的應用因為其脫靶活性一度停滯不前。它通過guide RNA（gRNA）與靶向DNA序列的配對，從而將Cas9錨定在靶向基因并誘導產生DNA雙鏈斷裂（DSB）。在基因編輯誘發的DSB的修復過程中，一定幾率會產生基因突變或者外源DNA片段的插入，從而達到基因編輯的目的。在實際應用過程中，一個好的基因編輯酶Cas9需要同時滿足高效切割靶位點、低脫靶活性和低染色體異常三個特點。目前在這三個方面，有一部分基于PCR的方法用于估算基因編輯效率，但其結果可靠性有待提高；有一些基于高通量測序的方法可以在體內或者體外檢測基因編輯酶的脫靶活性；尚無系統的可定量的測量基因組異常結構的方法。本項目開發了一種新的方法，可以用來同時定量檢測Cas9編輯效率和脫靶活性以及編輯引起的染色體異常結構，即primer-extension-mediated sequencing（PEM-seq）。這是對基因編輯和DNA損傷修復等領域都有巨大促進作用的新技術。與此同時，該項目包括了該團隊利用PEM-seq篩選出的一個相比于現有Cas9變體具有更低脫靶活性且與野生型Cas9切割效率相當的Cas9變體further enhanced Cas9 (FeCas9)。

發酵香腸是一類高檔肉制品，以其風味受到消費者歡迎。本技術利用酶法促 進發酵香腸生產過程中風味的形成，在保持產品原有風味、香型不變的情況下， 使其風味物質形成量增大 7 倍（以 GC/MS 出峰面積計），生產時間明顯縮短，產 品風味更濃、持久性更強。