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可遺傳編碼的組蛋白光交聯(lián)標(biāo)簽

2021-04-11 00:00:00
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關(guān)鍵詞: 組蛋白
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所屬領(lǐng)域:
化學(xué)化工
項目成果/簡介:

組蛋白的翻譯后修飾對于表觀遺傳調(diào)控及多種生物學(xué)過程具有重要意義。一系列新的賴氨酸化學(xué)修飾(如巴豆酰化、琥珀酰化等)展示出組蛋白修飾前所未有的多樣性及動態(tài)變化特征。可遺傳編碼的光交聯(lián)探針已經(jīng)成為研究活細(xì)胞內(nèi)蛋白-蛋白相互作用的重要工具,成功地將該技術(shù)拓展到組蛋白的化學(xué)修飾研究中,開發(fā)了可遺傳編碼的組蛋白光親和標(biāo)簽,將會極大地推動組蛋白化學(xué)修飾的識別機制和功能研究。


?該技術(shù)的設(shè)計包括兩個部分:a)一套帶有翻譯后修飾的賴氨酸遺傳編碼系統(tǒng),可以在特定位點插入帶修飾的賴氨酸。此外,在賴氨酸的主鏈上還帶有光交聯(lián)基團,可在UV光下與修飾相關(guān)的蛋白發(fā)生共價交聯(lián),可以用于研究該修飾特定的效應(yīng)蛋白。b)一套帶有保護基團的賴氨酸遺傳編碼系統(tǒng),保護基團可以在大腸桿菌自身的還原性環(huán)境中發(fā)生脫除,將帶有光交聯(lián)基團的賴氨酸定點插入到組蛋白當(dāng)中,用于證實交聯(lián)到的效應(yīng)蛋白的特異性。該團隊以巴豆酰化修飾為代表,發(fā)展了該技術(shù)對應(yīng)的賴氨酸巴豆酰化修飾的光交聯(lián)探針(K*cr)和帶有保護基團的光交聯(lián)探針(PNBK*)兩個探針,將這兩種探針分別引入到組蛋白H3的56位和79位,并通過光交聯(lián)基團捕捉到了H3上79位巴豆酰化的去乙酰化酶Sirt3。

項目階段:
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